Diferenças Sexuais no Relaxamento Induzido pelo Agonista Seletivo do GPER em Artérias de Resistência de Ratos Gonadectomizados
Nome: POLLYANA PEIXOTO
Tipo: Tese de doutorado
Data de publicação: 11/02/2022
Orientador:
Nome |
Papel |
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| ROGER LYRIO DOS SANTOS | Orientador |
Banca:
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Papel |
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| ROGER LYRIO DOS SANTOS | Orientador |
Resumo: Introdução: Os efeitos não genômicos do estrogênio, que incluem efeitos vasculares rápidos, têm sido atribuídos ao receptor de estrogênio acoplado à proteína G (GPER). No entanto, os mecanismos subjacentes aos efeitos vasculares modulados pelo GPER não são bem conhecidos, inclusive no contexto das artérias de resistência, especialmente na privação de hormônios sexuais gonadais. Assim, investigamos a função vascular do GPER em artérias mesentéricas de resistência de ratos gonadectomizados de ambos os sexos.
Métodos: Foram utilizados ratos Wistar (12 semanas de idade) de ambos os sexos. A gonadectomia foi realizada. Após 21 dias, os ratos foram eutanasiados. Artérias mesentéricas de terceira ordem foram isoladas e montadas. Curvas de concentração-resposta foram obtidas por adições cumulativas do agonista G-1 (1 nM - 10 μM) ou veículo (dimetilsulfóxido DMSO) em vasos pré-contraídos com fenilefrina. Os efeitos vasodilatadores do G-1 foram avaliados antes e após a remoção do endotélio ou incubação por 30 min com inibidor não seletivo da enzima óxido nítrico sintase (NOS), inibidor não seletivo da enzima ciclooxigenase (COX), inibidor inespecífico da enzima citocromo P450 (CYP) ou varredor enzimático de H2O2 (L-NAME, INDOMETACINA, CLOTRIMAZOL e CATALASE, respectivamente), inibidor da via de sinalização rápida PI3K-Akt (LY-294,002), inibidor seletivo da enzima iNOS (1400W), inibidor seletivo da enzima nNOS (L-NPA), antagonista seletivo de GPER (G36) e antagonista simultâneo do REα e REβ (ICI 182,780). A expressão proteica tecidual da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS), óxido nítrico sintase neuronal (nNOS), proteína quinase B (Akt 1/2/3) e quinase regulada por sinais extracelulares (ERK 1/2) foi mensurada por western blotting, com e sem estímulo (G-1, 10 μM). Os níveis vasculares de óxido nítrico (NO) e peróxido de hidrogênio (H2O2) foram determinados in situ utilizando a sonda diacetato de 4-amino-5-metilamino-2 `, 7`-difluorofluoresceína (DAF-FM) e 2´,7´ diclorodihidrofluoresceína-diacetato (DCF-DA), respectivamente, com e sem estímulo de G-1 [10 μM] na presença ou não de L-NAME [300 μM] ou catalase [1000 unt/ml], respectivamente. A imunofluorescência para marcação do GPER ou iNOS foi realizada nas artérias investigadas por imunofluorescência. Os dados foram analisados por ANOVA uma ou duas vias, seguida do teste post-hoc de Bonferroni/ Newman-Keuls ou Teste-t. Teste de Mann-Whitney foi utilizado para os dados não-paramétricos. Foi considerado p < 0,05. Os protocolos foram aprovados pela CEUA-UFES (067/2017).
Resultados: O agonista seletivo do GPER induziu relaxamento dependente de concentração nas artérias mesentéricas de resistência de fêmea (93.6 ± 0.8 %) e macho (90.0 ± 1.3 %) gonadectomizados, sem diferença entre os sexos. Na ausência de endotélio, a resposta ao G-1 foi diminuída em fêmea (54.4 ± 1.6 %) e macho (46.9 ± 1.9 %), mas não foi abolida. A marcação do GPER foi similar nas secções arteriais dos grupos estudados, independente da camada vascular. O vasorelaxamento foi atenuado em ambos os grupos na presença de L-NAME (OVX: 68.5 ± 6.6 % vs ORX: 65.3 ± 4.0 %). A produção local de NO também foi similar nos animais gonadectomizados. 1400W (OVX: 96.5 ± 1.2 % vs ORX: 63.6 ± 5.4 %*) e LY-294,002 (OVX: 91.7 ± 2.1 % vs ORX: 75.6 ± 3.5 %*) reduziram a resposta à concentração máxima apenas no macho. A marcação da iNOS foi significativamente maior nas secções arteriais dos animais ORX. A expressão proteica da p-eNOS (OVX: 99.6 ± 7.4 U.A vs ORX: 151.8 ± 5.5 U.A*) e p-Akt 1/2/3 (OVX: 104.3 ± 7.9 U.A
vs ORX: 134.5 ± 7.9 U.A*) foram maiores no grupo ORX. eNOS (OVX: 104.2 ± 12.6 U.A vs ORX: 117.1 ± 5.8 U.A), Akt 1/2/3 (OVX: 108.0 ± 6.6 U.A vs ORX: 107.9 ± 14.6 U.A) e ERK 1/2 (OVX: 91.1 ± 2.2 U.A vs ORX: 96.4 ± 1.7 U.A) total foram similares entre os grupos. Por outro lado, p-ERK 1/2 apresentou aumento na expressão somente no grupo OVX (OVX: 146.2 ± 2.2 U.A* vs ORX: 97.0 ± 14.5 U.A). L-NPA (OVX: 88.3 ± 2.3 % vs ORX: 84.8 ± 3.3 %) promoveu maior responsividade vasodilatadora em ambos os sexos, sem alterar a resposta vasodilatadora à concentração máxima. A expressão proteica da nNOS total foi aumentada, sem diferença entre os grupos, após o estímulo com agonista (OVX: 126.5 ± 5.6 U.A vs ORX: 124.0 ± 17.9 U.A). CATALASE (OVX: 72.1 ± 2.9 %* vs ORX: 90.7 ± 2.8 %) reduziu o relaxamento à concentração máxima apenas na fêmea. A produção in situ de H2O2 também foi maior nas secções arteriais das fêmeas. INDOMETACINA (OVX: 97.1 + 1.0 % vs ORX: 95.3 ± 0.6 %) e CLOTRIMAZOL (OVX: 92.4 ± 2.3 % vs ORX: 92.2 ± 2.1 %) não reduziram o vasorelaxamento em nenhum dos grupos.
Conclusão: Esses achados sugerem que o GPER modula o relaxamento vascular por meio de diferentes mediadores endoteliais e mecanismos que variam de acordo com o sexo. Os resultados obtidos no presente estudo fornecem uma nova visão sobre os efeitos das respostas induzidas pelo estrogênio via GPER sobre a função vascular na privação de hormônios sexuais gonadais.
